細胞傳代培養(yǎng)操作流程
細胞復蘇：
1. 將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水浴鍋中回溫，回溫后噴以75%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。如配置：50mL*培養(yǎng)基(含10%FBS，1%青雙抗) 44.5mL基礎培養(yǎng)基+ 5mL FBS + 0.5mL青雙抗。
2. 戴防護手套后，自液氮罐中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，立即放入37℃水槽中快速解凍（避冰晶重新結晶而造成細胞死亡），輕搖冷凍管使其在2分鐘內全部融化，以75%酒精擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內。
3. 將解凍的1mL細胞懸液緩緩加入細胞培養(yǎng)瓶內，再向瓶中加入10mL*培養(yǎng)基(稀釋比例為1:10)，混合均勻，放入37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取0.1ml解凍胞懸液作存活測試。(Sf9細胞在27℃生長，可不需CO2)
4. 一般而言，細胞大都不需立即去除冷凍保護劑(例如DMSO)。若要立即去除，則將解凍的細胞懸液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內，離1300rpm，5分鐘，移去上清液，加入新鮮培養(yǎng)基，混合均勻，放入CO
2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。
傳代培養(yǎng)：
1.37℃恒溫培養(yǎng)約48小時，待細胞長滿80-90%后，從培養(yǎng)箱取出75cm
2培養(yǎng)瓶，倒掉培養(yǎng)基。加入5mLPBS緩沖液吹打以洗去殘留血清，倒掉緩沖液。
2.沿壁（無細胞的一面）緩緩加入1mL溶液消化細胞約
1min，輕輕搖晃，倒掉殘余，將培養(yǎng)瓶置于恒溫箱中約1min，拿出培養(yǎng)瓶輕輕拍打一下細胞貼壁的一面。
注意：消化溫度是37℃，加液后用移液管反復吹打分散細胞。
3.向瓶中加入5mL*培養(yǎng)基，反復吹打均勻2min，從中取出至0.5ml小離心管中，向管中加入80μl臺盼藍溶液，混勻，從混合液中取出10μl至蓋好蓋玻片的計數(shù)板上，計算細胞密度及活率。
4.將5mL細胞懸液全部吸出，分別接種1mL懸液到原培養(yǎng)基瓶和另一新的培養(yǎng)瓶中，其余舍棄。再向兩瓶中各加入10mL*培養(yǎng)基，置于CO2培養(yǎng)箱養(yǎng)。（細胞傳代時按1：5或更大比例稀釋）
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